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免疫共沉淀(Co-IP)


一、免疫共沉淀(Co-IP)概述

       免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation, Co-IP)是利用抗原和抗体的特异性结合以及细菌的ProteinA或G特异性地结合到免疫球蛋白的Fc片段的原理开发出来的方法。其基本原理是,为了研究细胞中蛋白A与蛋白B是否结合,在细胞裂解液中加入抗蛋白A的抗体,孵育后再加入与抗体特异结合的结合于Agarose珠上的ProteinA或G,若细胞中有与蛋白A结合的蛋白B,就可以形成这样一种复合物:“蛋白B—蛋白A—抗蛋白A抗体—agaroseProteinA或G”,经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,复合物又被分开。蛋白B然后经western blot或质谱检测目的蛋白。蛋白A这种方法得到的蛋白B是在细胞内与兴趣蛋白天然结合的,符合体内实际情况,得到的结果可信度高。

免疫共沉淀流程

二、技术流程

       1、收集经过处理的细胞,加入适量细胞裂解缓冲液(含蛋白酶抑制剂),冰上裂解30 min, 细胞裂解液于4°C,12000转离心30 min后取上清;
       2、取少量裂解液以备免疫印迹分析,剩余裂解液中加入适量的相应抗体,4 °C缓慢摇晃孵育过夜;
       3、取10μL protein A 或GAgarose珠,用适量裂解缓冲液洗3次,每次3000 rpm离心3 min;
       4、将预处理过的10 μl protein A 或G琼脂糖珠加入到经过与抗体孵育的细胞裂解液中,4 °C缓慢摇晃孵育2~4h,使抗体与protein A或GAgarose珠偶联;
       5、免疫沉淀反应后,在4 °C以3000 rpm 速度离心3min,将琼脂糖珠离心至管底;将上清小心吸去,琼脂糖珠用1mL裂解缓冲液洗3-4次;最后加入15 μL的3×SDS 上样缓冲液,沸水煮5分钟;
       6、SDS-PAGE, 免疫印迹或质谱仪分析。

 
三、样品要求

       1、顾客提供:蛋白质样品(组织、细胞、蛋白质溶液等)、用于免疫共沉淀的一抗及目的蛋白的相关信息;
       2、需要通过转染载体表达基因的,提供表达载体,或由本公司构建载体;
       3、其他免疫共沉淀相关信息。
       4、运输要求:干冰包装寄送


四、报告内容及标准

       1、免疫共沉淀电子图片及分析结果;
       2、相互作用蛋白鉴定结果,质谱鉴定结果和(或)western blot鉴定结果;
       3、完整的实验步骤、软件检索等参数
       根据甲方要求而制定具体的内容,详细请依所签约合同的内容为准。


五、收费标准及服务周期

       收费标准及服务周期因根据客户提供的样品不同而有所改变,详细请跟客服专员联系或参考所签署的合作合同。

六、质量保证

       提供客观、公正的免疫共沉淀实验结果。

七、售后服务

       我们将不定期进行客户回访,以提高我们的服务质量。